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細胞穩(wěn)定轉(zhuǎn)染和瞬時轉(zhuǎn)染有哪些區(qū)別?

 更新時間:2024-04-08 點擊量:1121

在細胞實驗中,細胞轉(zhuǎn)染是一項常用的技術(shù),用于引入外源基因、表達蛋白或沉默目標基因等。其中,細胞的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染和瞬時轉(zhuǎn)染是兩種常見的轉(zhuǎn)染方式。細胞穩(wěn)定轉(zhuǎn)染和瞬時轉(zhuǎn)染有哪些區(qū)別?讓我們一起來看看吧!

類別

特點

適用范圍

穩(wěn)定轉(zhuǎn)染

長期穩(wěn)定表達目標基因

長期功能研究和穩(wěn)定表達需求的實驗

可通過篩選和擴增獲得穩(wěn)定表達的細胞系

長期細胞培養(yǎng)和細胞系建立

使用脂質(zhì)體、病毒載體或DNA轉(zhuǎn)染等方法

大規(guī)模蛋白表達和基因敲入研究

瞬時轉(zhuǎn)染

快速實現(xiàn)臨時的基因表達

短期功能研究和臨時表達需求的實驗

無需篩選和擴增細胞系

短期細胞培養(yǎng)和快速結(jié)果分析

使用脂質(zhì)體、磷酸共沉淀或電穿孔等方法

功能驗證、藥物篩選和基因敲除實驗

一、穩(wěn)定轉(zhuǎn)染

類別:質(zhì)粒轉(zhuǎn)染、病毒轉(zhuǎn)染(包括慢病毒、腺病毒等)

優(yōu)點:長期穩(wěn)定表達目標基因,適用于長期研究和功能驗證,適合蛋白表達與純化、藥物篩選等實驗

缺點:構(gòu)建過程耗時,篩選穩(wěn)定細胞系可能困難

操作步驟:

選擇合適的載體(質(zhì)?;虿《据d體)和轉(zhuǎn)染方法(化學(xué)轉(zhuǎn)染、電穿孔等)

將目標基因?qū)肽繕思毎?/p>

篩選和鑒定穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞系

進行功能驗證和后續(xù)實驗

二、瞬時轉(zhuǎn)染

類別:siRNA 轉(zhuǎn)染、蛋白轉(zhuǎn)染、化學(xué)轉(zhuǎn)染等

優(yōu)點:快速實現(xiàn)目標效應(yīng),適用于短期實驗和基因沉默研究,操作相對簡單

缺點:效應(yīng)具有瞬時性,不適用于長期穩(wěn)定表達或長期功能研究

操作步驟:

設(shè)計合適的 siRNA 序列(對于 siRNA 轉(zhuǎn)染)

選擇適當(dāng)?shù)霓D(zhuǎn)染試劑和方法

轉(zhuǎn)染目標細胞并培養(yǎng)一定時間以觀察效應(yīng)

進行基因沉默或目標蛋白的功能研究

穩(wěn)轉(zhuǎn)和瞬轉(zhuǎn)并不是互斥的,而是根據(jù)實驗需求和目的的不同選擇不同的轉(zhuǎn)染方式。

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