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重點推介:Wako蛋白磷酸化丙烯酰胺Phos-tag™ Acrylamide AAL-107

 更新時間:2023-11-17 點擊量:630

Phos-tag™是一種可特異性捕獲磷酸化Ser、Thr、Tyr等物質(zhì)的功能分子,由日本廣島大學(xué)醫(yī)齒藥學(xué)綜合研究科醫(yī)學(xué)品分子機能科學(xué)研究室開發(fā)。以Phos-tag™ 丙烯酰胺(Phos-tagAcrylamide)為首開發(fā)的多種Phos-tag™ 產(chǎn)品被應(yīng)用于世界范圍內(nèi)的基礎(chǔ)研究,并且在GPCR通路及Wnt通路的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分析方面也取得了優(yōu)秀成果。

在制備SDS-PAGE預(yù)制膠過程中加入Phos-tagAcrylamide,即可根據(jù)磷酸化水平和磷酸化位點分離磷酸化蛋白與非磷酸化蛋白。

原理:

圖片5.png

1. 電泳中的磷酸化蛋白捕獲2個二價金屬離子。

2. 磷酸化水平越高電泳速度越慢。

3. 根據(jù)磷酸化水平進行分離。(即使磷酸化位點的數(shù)目相同,但只要位置不同就能分離)

實驗數(shù)據(jù)

①α-casein去磷酸化反應(yīng)隨時間的變化

圖片6.png

使用堿性磷酸酶隨時間(孵育時間:0-120 min)處理α-casein,并使用Phos-tagSDS-PAGE和常規(guī)SDS-PAGE分離去磷酸化處理的樣品。

②野生型/突變型Noxa表達的MCL-1磷酸化水平變化

圖片7.png

③二維電泳中的應(yīng)用:hnRNP K異構(gòu)體的磷酸化分析

圖片8.png

通過免疫沉淀法,從經(jīng)LPS刺激后的小鼠巨噬細胞J774.1的細胞核提取液中,分離得到hnRNP K。在二維電泳中,一維使用IPG膠(pH 4.7-5.9),二維使用Phos-tagSDS-PAGE,分離hnRNP K的異構(gòu)體(66 kDa,64 kDa)。使用質(zhì)譜儀可以確認不同的點代表不同的異構(gòu)體或修飾位點。

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