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原代細(xì)胞培養(yǎng)分離的注意事項(xiàng)

 更新時(shí)間:2024-02-26 點(diǎn)擊量:339
  原代細(xì)胞培養(yǎng)分離的注意事項(xiàng)
  原代細(xì)胞是指從機(jī)體的組織經(jīng)蛋白酶或其它的方法獲得單個(gè)細(xì)胞并在體外進(jìn)行模擬機(jī)體培養(yǎng)的細(xì)胞,稱為原代細(xì)胞。一般認(rèn)為,培養(yǎng)的原代的第1代細(xì)胞和傳代到第10代以內(nèi)的細(xì)胞統(tǒng)稱為原代細(xì)胞培養(yǎng)。那么你知道原代細(xì)胞培養(yǎng)的分離注意事項(xiàng)有什么嗎?讓我們一起來(lái)看看吧!
  1、組織塊培養(yǎng)法
  1)組織塊接種后的前3天,在觀察和移動(dòng)的過(guò)程中,注意不要引起液體的振蕩。要避免經(jīng)常翻動(dòng)和振動(dòng),否則組織塊不易附著于瓶壁上或附著后也會(huì)脫落飄起。
  2)加入的培養(yǎng)液不宜過(guò)多,避免浸泡的組織塊受輕微的波動(dòng)而脫落下來(lái)。
  3)當(dāng)細(xì)胞向外遷徙出來(lái)后要注意記錄并去除漂浮的組織塊和殘留的細(xì)胞,它們產(chǎn)生的有毒物質(zhì)會(huì)影響原代細(xì)胞的生長(zhǎng)。
  4)為促進(jìn)組織塊盡快粘貼在培養(yǎng)瓶皿上,可以在種植前先將膠原薄層涂在培養(yǎng)瓶底壁上。
  2、貼壁型原代細(xì)胞
  1)原代培養(yǎng)的分離細(xì)胞在初次接觸體外環(huán)境時(shí),它們之間會(huì)互相影響,在這些細(xì)胞之間能產(chǎn)生一些促生長(zhǎng)的活性物質(zhì),使細(xì)胞彼此互相促進(jìn)存活和生長(zhǎng)。如果接種的細(xì)胞密度過(guò)低,細(xì)胞之間的促生長(zhǎng)作用很小,也很難使細(xì)胞適應(yīng)從體內(nèi)的組織環(huán)境到被分散后進(jìn)入獨(dú)立生存環(huán)境的變化過(guò)程。如果接種的細(xì)胞密度過(guò)大,會(huì)導(dǎo)致營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)供應(yīng)不足,代謝廢物積累較快需要經(jīng)常換液和傳代。
  2)適當(dāng)增大原代培養(yǎng)接種的細(xì)胞密度,給培養(yǎng)的細(xì)胞提供更多的類似于在體內(nèi)時(shí)細(xì)胞之間的相互作用,會(huì)極大提高原代培養(yǎng)的細(xì)胞在體外存活率。待細(xì)胞適應(yīng)體外環(huán)境后進(jìn)行傳代培養(yǎng)時(shí)再以較低的密度接種和培養(yǎng)。
  3)盡快使接種的細(xì)胞貼壁,是決定培養(yǎng)能否成功的關(guān)鍵??梢栽诮臃N后先將培養(yǎng)瓶置培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)3h到5h,待細(xì)胞貼壁后,再補(bǔ)足培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。
  3、懸浮型原代細(xì)胞
  1)必須保持細(xì)胞的懸浮狀態(tài)??梢酝ㄟ^(guò)增加培養(yǎng)液的黏度來(lái)幫助細(xì)胞呈懸浮狀態(tài),如給培養(yǎng)液中加入低濃度的透明質(zhì)酸復(fù)合物。在有攪拌裝置的培養(yǎng)器皿內(nèi)加入培養(yǎng)液是,以5ml為z低限度,否則攪拌時(shí)會(huì)產(chǎn)生氣泡對(duì)細(xì)胞造成傷害。使用這種方式需注意勿使攪拌速度過(guò)快,否則即可使培養(yǎng)液溢出又容易造成污染。如果培養(yǎng)液的量在5ml以下,可以采用旋轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)。給懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞換液時(shí)要注意不要吸出細(xì)胞。
  2)能夠進(jìn)行懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞,其生命力一般都比較旺盛,體外分裂增殖的速度較快,營(yíng)養(yǎng)成分消耗大,換液時(shí)間隔一般較短。
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